15 版與10版《中國(guó)藥典》中制藥微生物無(wú)菌檢查對(duì)比
發(fā)布時(shí)間：2019-11-21 瀏覽次數(shù)：5604
2015年版《中國(guó)藥典》在微生物檢驗(yàn)方法上做了很多更新，今天就簡(jiǎn)單講下新版藥典無(wú)菌檢查有哪些改動(dòng)。
1、 微生物檢測(cè)環(huán)境
對(duì)于微生物檢測(cè)環(huán)境的要求，原10版藥典是在10000級(jí)下的局部100級(jí)的單向流空氣區(qū)域或隔離系統(tǒng)中進(jìn)行。而15版藥典在“1101無(wú)菌檢查法”中則寫(xiě)道，無(wú)菌檢查應(yīng)在無(wú)菌條件下進(jìn)行，實(shí)驗(yàn)環(huán)境必須達(dá)到無(wú)菌檢查的要求，檢驗(yàn)全過(guò)程應(yīng)嚴(yán)格遵守?zé)o菌操作，防止微生物污染，防止污染的措施不得影響供試品中微生物的檢出。突然看到這的，大家可能會(huì)感到疑惑，這不就是沒(méi)有要求了嗎？
相對(duì)于10版的要求，這反而是降低了檢測(cè)環(huán)境的要求。其實(shí)，并不是如此，“9203藥品微生物實(shí)驗(yàn)室質(zhì)量管理指導(dǎo)原則”中，則是寫(xiě)出了無(wú)菌檢查應(yīng)在B級(jí)背景下的A級(jí)單向流潔凈區(qū)域或隔離系統(tǒng)中進(jìn)行。檢測(cè)環(huán)境并沒(méi)有降低標(biāo)準(zhǔn)，只是變成了推薦，變換了位置，因此對(duì)于藥典的解讀和學(xué)習(xí)真的需要我們靜下心來(lái)，認(rèn)真的去學(xué)習(xí)。
2、 微生物培養(yǎng)基
其次對(duì)培養(yǎng)基要求 。在微生物檢驗(yàn)中，培養(yǎng)基是實(shí)驗(yàn)的重要組成部分。檢驗(yàn)的合理性和真實(shí)性，主要是通過(guò)培養(yǎng)基來(lái)實(shí)現(xiàn)的。10版藥典檢驗(yàn)用的是改良馬丁培養(yǎng)基和硫乙醇酸鹽流體培養(yǎng)基，而15版藥典則是改用了胰酪大豆胨液體培養(yǎng)和硫乙醇酸鹽流體培養(yǎng)基。
不知道大家在藥典升級(jí)的時(shí)候有沒(méi)有做過(guò)培養(yǎng)基的促生長(zhǎng)能力的對(duì)比，當(dāng)時(shí)我們有簡(jiǎn)單做過(guò)，就生長(zhǎng)時(shí)間而言，胰酪大豆胨液體培養(yǎng)基比改良馬丁的增長(zhǎng)時(shí)間要短些，簡(jiǎn)而言之就是前者的生長(zhǎng)狀況會(huì)更好些。同時(shí)，硫乙醇酸鹽流體培養(yǎng)基在培養(yǎng)某些芽孢桿菌的能力上有局限性，胰酪大豆胨液體培養(yǎng)基則可以作為很好的補(bǔ)充。如何確定培養(yǎng)基是否質(zhì)量合格，或者怎樣才能用于無(wú)菌檢驗(yàn)，這就要看培養(yǎng)基促生長(zhǎng)實(shí)驗(yàn)或者說(shuō)靈敏度測(cè)試了。當(dāng)然對(duì)于無(wú)菌檢測(cè)的培養(yǎng)基還需要進(jìn)行培養(yǎng)基的無(wú)菌性實(shí)驗(yàn)。
原10版藥典中靈敏度實(shí)驗(yàn)是這樣描述：
“取每管裝量為12ml的硫乙醇酸鹽流體培養(yǎng)基9支，分別接種小于100CFU的金黃色葡萄球菌、銅綠假單胞菌、枯草芽孢桿菌、生孢梭菌各2 支， 另1支不接種，作為空白對(duì)照，置30~35℃培養(yǎng)3天；取每管裝量為9m的改良馬丁培養(yǎng)基5支，分別接種小于100CFU的白色念珠菌、黑曲霉各2支，另1支不接種，作為空白對(duì)照，置20~25℃培養(yǎng)5天。逐日觀察結(jié)果。”
15版藥典則變的更加平衡：
“取每管裝量為12ml 的硫乙醇酸鹽流體培養(yǎng)基7 支，分別接種小于100CFU的金黃色葡萄球菌、銅綠假單胞菌、生孢梭菌各2 支，另1 支不接種作為空白對(duì)照，培養(yǎng)3 天；取每管裝量為9ml 的胰酪大豆胨液體培養(yǎng)基7支,分別接種小于100CFU的枯草芽孢桿菌、白色念珠菌、黑曲霉各2支，另1支不接種作為空白對(duì)照，培養(yǎng)5天。逐日觀察結(jié)果。”
從說(shuō)明上可以看出，15版藥典更加接近美國(guó)藥典和歐洲藥典。從促生長(zhǎng)能力上來(lái)說(shuō)，胰酪大豆胨液體培養(yǎng)基在促進(jìn)芽孢桿菌的生長(zhǎng)能力上優(yōu)于硫乙醇酸鹽流體培養(yǎng)基，無(wú)菌檢查使用前者進(jìn)行芽孢桿菌的檢測(cè)，因此需要用芽孢桿菌考察其促生長(zhǎng)能力。不僅培養(yǎng)基靈敏度實(shí)驗(yàn)10版藥典和15版藥典有所不同，而且培養(yǎng)基的無(wú)菌性實(shí)驗(yàn)也是有所不同。10版要求“每批培養(yǎng)基隨機(jī)抽取不少于10支（瓶），5支（瓶）置3 0 ~ 3 5 ℃、另5支（瓶）置2 0 ~ 2 5 ℃培養(yǎng)14天，均應(yīng)無(wú)菌生長(zhǎng)。”
而15版則要求，“每批培養(yǎng)基隨機(jī)取不少于5支（瓶），置各培養(yǎng)基規(guī)定的溫度培養(yǎng)14 天，應(yīng)無(wú)菌生長(zhǎng)。”15版藥典取消了兩個(gè)溫度培養(yǎng)的要求，完全根據(jù)相應(yīng)的培養(yǎng)時(shí)間去進(jìn)行無(wú)菌性培養(yǎng)。這樣得出的結(jié)果更加合理，且滿足檢驗(yàn)環(huán)境，畢竟我們不是進(jìn)行模擬灌裝，兩個(gè)溫度確實(shí)是有點(diǎn)不合理。當(dāng)然這是個(gè)人觀點(diǎn)，如有其他的觀點(diǎn)歡迎探討。
3、 方法適用性實(shí)驗(yàn)
在方法適用性實(shí)驗(yàn)中。10版藥典，方法適用性的菌種和培養(yǎng)基靈敏度所使用的是一樣的。而15版藥典中則將靈敏度實(shí)驗(yàn)中的銅綠假單胞菌變成了大腸桿菌，這是因?yàn)榇竽c埃希菌對(duì)于一些抗革蘭氏陰性菌的抗生素更加敏感，所以在做無(wú)菌方法性實(shí)驗(yàn)的時(shí)候這點(diǎn)要十分注意。
藥典改版后，大家也多數(shù)選擇薄膜過(guò)濾法進(jìn)行無(wú)菌實(shí)驗(yàn)，因此大家也會(huì)注意到一點(diǎn)，緩沖液沖洗量不要超過(guò)1000mL，對(duì)于這個(gè)地方，大家會(huì)帶來(lái)些許疑惑，因?yàn)橛械臅r(shí)候可能樣品就超過(guò)了這個(gè)量，那我們的是要該怎么做呢？其實(shí)大家應(yīng)該仔細(xì)看看藥典要求，他說(shuō)的是緩沖液沖洗量，并沒(méi)有說(shuō)和樣品加在一起。當(dāng)然對(duì)于要進(jìn)行歐盟和FDA 審計(jì)注冊(cè)的時(shí)候還要注意一點(diǎn)，對(duì)于膜的沖洗歐洲藥典和美國(guó)藥典要求不大于500mL。
然后是日常檢驗(yàn)，依據(jù)方法適用性的檢測(cè)方法進(jìn)行測(cè)試。但值得注意的地方是，中國(guó)藥典要進(jìn)行陽(yáng)性實(shí)驗(yàn)，而歐美藥典則在日常檢驗(yàn)中沒(méi)有要求進(jìn)行陽(yáng)性實(shí)驗(yàn)。也要注意，陽(yáng)性實(shí)驗(yàn)中中國(guó)藥典要根據(jù)產(chǎn)品特性進(jìn)行菌種的添加，所以大家對(duì)于陽(yáng)性實(shí)驗(yàn)要有合理的評(píng)估，然后再進(jìn)行菌種的添加。
總結(jié)：在做無(wú)菌檢驗(yàn)過(guò)程中，實(shí)際問(wèn)題我們需要根據(jù)實(shí)際情況去分析。在面臨問(wèn)題時(shí)候，不要急，也不要慌，合理的去思考問(wèn)題，解決問(wèn)題，這樣才有利于我們優(yōu)化過(guò)程。
文章轉(zhuǎn)載自微生物研究院，僅為技術(shù)交流。
