細胞實驗注意事項及配制基礎培養基操作步驟
發布時間：2023-10-25 瀏覽次數：1176
以下是平臺里的科研小姐姐在做細胞實驗時積累的一些經驗和心得，分享給大家，目的是為了讓實驗新手小白能夠快速上手養細胞。
細胞實驗全程注意事項
1. 無菌操作是重中之重！！！細胞培養對無菌條件比較苛刻，實驗人在進行整個細胞實驗的無菌意識一定要強，否則一個不小心，發生細菌污染，輕則浪費細胞，重則污染整個培養箱。
2. 實驗人員進入細胞房前應該換上干凈的鞋子、白大褂、手套和口罩。
3. 所有耗材放入工作臺前都需用75%酒精進行消毒，雙手進入工作臺前也需要用75%的酒精進行消毒。
4. 進行實驗前應先對工作臺進行紫外滅菌30min以上，并將所有需要用到的耗材放到工作臺上一起進行紫外滅菌（簡稱照臺）。
5. 使用酒精燈的實驗室需要特別注意安全，剛噴灑完酒精的物品不要靠近酒精燈，有生物安全柜的實驗室則不需要使用酒精燈。
6. 進行實驗前應先用酒精棉擦拭工作臺，所有操作都應在靠近酒精燈火焰下方進行（有生物安全柜的則不需要使用酒精燈）。
7. 實驗結束后應及時將垃圾處理，再用酒精棉擦拭工作臺，對工作臺進行紫外滅菌30min以上。
配制基礎培養基
以下配制的是基礎培養基，主要用于普通細胞的增殖培養，如小鼠RAW264.7巨噬細胞，內含2%的雙抗和10%的胎牛血清。個別特殊細胞需要配制特殊的培養基進行培養。
01 準備材料：50mL離心管、封口膜、鑷子、移液槍、DMEM培養液、雙抗、胎牛血清等。
02 操作步驟：
1. 用移液槍吸取44mL的DMEM培養液，轉移至離心管中。注意槍頭不要碰到培養液瓶口。
2. 用移液槍吸取1mL的雙抗，轉移至離心管中，吹打混勻。
3. 用移液槍吸取5mL的胎牛血清，轉移至離心管中，吹打混勻。
4. 用封口膜將離心管封口，置于4℃保存。
5. 雙抗、胎牛血清置于-20℃長期保存，置于4℃短期保存。
6. DMEM培養液置于4℃保存。
03 注意事項：
1. 配制好的培養基盡快使用，一般可存放三個月左右，放置久了里面的物質可能會失活，培養出來的細胞狀態就不這么好了。
2. 使用移液槍時，注意槍頭不要碰到任何東西，如果碰到了，不要猶豫馬上丟棄。
3. 雙抗、胎牛血清應避免反復凍融，可根據需要將其分裝保存。
文章來源：“金信科研”公眾號，作者~
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