幾種活菌計數法的比較和應用
發布時間：2023-11-01 瀏覽次數：8224
活菌計數法又稱間接計數法。直接計數法測定到的是死、活細胞總數，間接計數法測得的僅是活菌數。這類方法所得的數值往往比直接計數法測得的數值小。活菌計數法一般有平板菌落計數法、MPN法、薄膜過濾計數法和比濁法。
1.平板菌落計數法：此法是基于每一個分散的活菌在適宜的培養基中具有生長繁殖并能形成一個菌落的能力。主要有傾注法、涂布法和螺旋接種法。
1.1 傾注法：先往培養皿中傾注一定量的菌液，然后再加入培養基，快速混勻，培養基凝固后，放入培養箱中培養。多用于菌落總數計數，操作簡單。
優點：接種量可以是0.1-2mL之間，對微生物計數結果相對準確；操作簡單，適用于各種樣品中菌落總數的測定。
缺點：無法觀察菌落特征，長在瓊脂內部的細菌分離麻煩，不適于嚴格好氧菌和熱敏感菌。樣品量多時，接種前中后工作必須連續操作，很難簡化。
1.2 涂布法：先將培養基熔化后趁熱倒入無菌平板中，待凝固后吸取0.05-0.1mL菌懸液到瓊脂平板上，再用無菌涂布棒將菌液在平板上涂抹均勻。將涂抹好的平板平放于桌上20 — 30min，使菌液滲透入培養基內，然后將平板倒轉，保溫培養，至長出菌落后即可計數。多用于菌落總數計數，操作簡單。
優點：方便觀察菌落形態。
缺點：接種量比較少，而且涂布棒會帶走少量菌液，平行樣間誤差較大。要求樣品懸液中沒有大顆粒物（否則需要過濾），相對傾注法操作比較麻煩。
涂布計數法可以將倒平板和接種操作完全獨立分開，適于流水化作業，適用面更廣，促進了商品化成品平板的普及。
1.3 螺旋接種法：商業化的自動螺旋接種設備以阿基米德螺旋線的形式自動接種到瓊脂平板表面，是涂布接種法的升級。多用于菌落總數計數，適用于接種工作量比較大的單位。
優點：方便觀察菌落形態，均勻性較好，結果準確。
缺點：設備比較貴，啟動和收尾工作相對麻煩。
2.MPN法：這是一種應用概率理論來估算細菌濃度的方法，多用于檢測對檢樣含菌量不確定且精度要求不高樣品。例如食品、水質中大腸菌群和食品中金黃色葡萄球菌檢測。
3.薄膜過濾計數法：適用于檢驗含菌量低的液體或者氣體樣品。例如生活飲用水中總大腸菌的檢驗，醫藥用水和無菌制劑藥品中微生物檢測。
4.比濁法：適用于檢驗含菌量較高，對結果準確度要求不高、時效性要求比較高的樣品。例如工業發酵中菌濃度監測，原料奶新鮮度的美蘭實驗，市場上也有很多自動比濁設備，如ATP熒光儀檢測儀，微生物生長曲線檢測儀……
