飲用水中銅綠假單胞菌的污染、控制及檢驗
發布時間：2024-01-10 瀏覽次數：857
我們經常看見這樣的報道，某某飲用水廠商的一批飲用水中被查出銅綠假單胞菌超標，飲用水呈綠色，網友們紛紛調侃，水都不能喝了，該怎么生存？那么銅綠假單胞菌到底是什么？它是如何進入到飲用水中的？我們該如何預防這種細菌的侵害？
銅綠假單胞菌（P.Aeruginosa）：一種重要的水源性致病菌，廣泛存在于各類型水中，對消毒劑、干燥、紫外線等理化因素及不良環境具有很強的抵抗力；作為條件致病菌，可能引起急性腸道炎、腦膜炎、敗血癥和皮膚炎癥等疾病。因此，監測分析其污染原因并進行有效控制顯得尤為重要。
1 銅綠假單胞菌如何進入飲用水中的？
瓶（桶）裝水中銅綠假單胞菌的污染主要原因有水源受到污染，或現有的較為簡單的水生產加工工藝；或生產過程中衛生控制不嚴格，從業人員未經消毒的手直接與礦泉水或容器內壁接觸；或包裝材料未進行徹底清洗消毒。
2 銅綠假單胞菌（P.Aeruginosa）檢驗
檢查食品（飲用水）中的銅綠假單胞菌成為食品抽檢必不可少的檢測項目，以檢測飲用水為例列舉銅綠假單胞菌的檢測方法（GB 8538-2022 食品安全國家標準 飲用天然礦泉水檢驗方法）：
一、檢驗流程：
二、操作步驟：
1.水樣過濾：用無菌鑷子夾取滅菌濾膜邊緣部分，將粗糙面向上，貼放在已滅菌的濾床上，固定好濾器，將250mL水樣或稀釋液通過孔徑0.45μm的濾膜過濾（環凱 20571102 0.45um微孔濾膜(無菌,混合纖維素CN-CA) 200片/盒），然后將過濾后的濾膜貼在已制備好的CN瓊脂平板上，平鋪并避免在濾膜和培養基之間夾留著氣泡。
2.培養：將平板倒置于36℃±1℃培養20 h~48 h，并防止干燥。
3.結果觀察
在培養20 h~24 h和40 h~48 h后觀察濾膜上菌落的生長情況并計數。
計數所有顯藍色或綠色(綠膿色素)疑似銅綠假單胞菌的菌落，并進行綠膿菌素確證性試驗。
在紫外線下檢查濾膜時，應避免長時間在紫外光下照射，否則可能會將平板上的菌落殺滅，而導致無法在證實培養基上生長。計數濾膜上所有發熒光不產綠膿色素疑似銅綠假單胞菌菌落，并進行乙酰胺肉湯確證性試驗。
將其他所有紅褐色不發熒光的菌落進行氧化酶測試、42℃生長、乙酰胺液體培養基、金氏B培養基確證性試驗，培養20 h~24 h觀察結果，防止因為培養40 h~48 h導致菌落過分生長而出現菌落融合。
在CN瓊脂上生長的菌落選擇和驗證步驟見表30。
三、生化鑒定
1、若CN板上是藍綠色（如下圖）疑似銅綠假單胞菌的菌落，需進行綠膿菌素確證性試驗
綠膿菌素試驗：將在CN瓊脂上呈藍色或綠色菌落的純培養物分別接種在綠膿菌素測定培養基上，置36℃±1℃培養24h±2h，加入三氯甲烷3mL~5mL，可搗碎培養基并充分振蕩使培養物中的綠膿菌素溶解于三氯甲燒，待三氯甲烷提取液呈藍色時，用吸管將三氯甲烷移到另一試管中，并加入1 mol/L的鹽酸1 ml，振蕩后靜置片刻。如上層鹽酸液內出現粉紅色到紫紅色時為陽性,表示被檢物中有綠膿菌素存在。
1.1 綠膿菌素測定培養基中加入三氯甲烷后的顏色（如下圖）
1.2 用吸管將三氯甲烷移到另一試管內加入鹽酸，振蕩，靜置（如下圖）
1.3 藍色菌落呈粉紅色，綠色菌落呈淡粉色，有綠膿菌素存在。
2、若CN板上有熒光（如下圖）
按照GB8538-2022標準，將在CN瓊脂上發熒光，非藍色且非綠色菌落，或不發熒光、紅褐色菌落純培養物接種到乙酰胺液體培養基中，在36 ℃±1 ℃下培養20 h~24 h。然后向每支試管培養物加入1滴~2滴鈉氏試劑，10 s內檢查各試管的顏色變化，如表現出從黃色到磚紅色的顏色變化，則為陽性結果，否則為陰性。
3、若CN板上是紅褐色
按照GB8538-2022標準，紅褐色菌落要進行產氨試驗、氧化酶試驗、42℃生長試驗、金氏B產熒光試驗。
鑒于本人經驗有限，接觸樣品不多，買的標準菌株也是綠色形態（前面那株藍色菌落也是樣品中發現的，甚是寶貴）。所以，至今未見過紅褐色菌落，若有同行有檢出或者見過，還望交流，多加學習。
3.1標準菌株形態（如下圖）
3.2產氨實驗（同上，略）
3.3氧化酶試驗（如下圖）
取2滴~3滴新鮮配制的氧化酶試劑滴到放于平皿里的潔凈濾紙上。用鉑/鉉，玻璃或其他適宜材質的接種環(棒)，將適量的CN瓊脂上不發熒光，紅褐色菌落的純培養物涂布在預備好的濾紙上。在10 s內顯深藍紫色的視為陽性反應。
3.4金氏B產熒光試驗（如下圖）
將在CN瓊脂上不發熒光、紅褐色且氧化酶反應呈陽性的培養物接種于金氏B培養基上，于36℃±1℃恒溫箱培養1d~5d。每天需取出在紫外燈下檢查其是否產生熒光，將5d內產生熒光的菌落記錄為陽性。
3.5 42℃生長試驗
將在CN瓊脂上發熒光、非藍色且非綠色菌落的純培養物接種營養瓊脂平板上，42℃±1℃培養24 h~-48 h，能生長的為陽性結果，否則為陰性。
4、其他
其他非前面三種，則判斷不是銅綠假單胞菌。
來源：環凱轉載于“食品微生物檢測”公眾號，文章來源食品論壇網友原創分享，文章版權歸原作者所有；
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