食品微生物檢驗副溶血性弧菌檢驗常用培養基原理解析
發布時間：2020-11-26 瀏覽次數：11190
?蛋白胨提供碳源、氮源、維生素、生長因子；高含量氯化鈉和高pH值可以抑制非弧菌類細菌生長，不影響副溶血性弧菌生長。
硫代硫酸鹽-檸檬酸鹽-膽鹽-蔗糖（TCBS）瓊脂
?配方中多價蛋白胨、酵母膏粉提供碳氮源、維生素和生長因子；氯化鈉可刺激弧菌的生長；蔗糖是可發酵的糖類；膽酸鈉、牛膽汁粉、硫代硫酸鈉和檸檬酸鈉及較高的pH可抑制革蘭氏陽性菌和大腸菌群；硫代硫酸鈉與檸檬酸鐵反應作為檢測硫化氫產生的指示劑；溴麝香草酚藍和麝香草酚藍是pH指示劑；瓊脂是培養基的凝固劑 。
?副溶血性弧菌不發酵蔗糖，不會使培養基pH降低，因而在該培養基上為綠色菌落，創傷和擬態弧菌都不發酵蔗糖，需進一步確證鑒定，霍亂弧菌發酵蔗糖為黃色。
副溶血性弧菌為綠色菌落
?配方中蛋白胨和酵母膏粉提供氮源、維生素、氨基酸和碳源；蔗糖為可發酵的糖類；抑菌劑抑制大部分非弧菌細菌，氯化鈉可維持均衡的滲透壓；瓊脂是培養基的凝固劑；混合色素與副溶血性弧菌、霍亂弧菌和創傷弧菌所對應的酶發生特異性反應，水解底物，釋放出顯色基團，在淡黃色平板上產生品紅色菌落(副溶血性弧菌)和綠-藍綠色的菌落(霍亂弧菌和創傷弧菌)。
副溶血性弧菌為品（紫）紅色菌落
3％氯化鈉胰蛋白胨大豆瓊脂
?胰蛋白胨、大豆蛋白胨提供氮源、維生素、生長因子；高含量氯化鈉可以抑制非弧菌類細菌生長，不影響副溶血性弧菌生長；瓊脂為凝固劑。
氧化酶試驗
? 原理：氧化酶使細胞色素C氧化，氧化型細胞色素C再氧化對苯二胺試劑形成紫色復合物，產生顏色反應。
操作：滴加1滴氧化酶試劑到一小塊潔凈濾紙上，用玻棒或接種環（鉑或塑料）挑取適量新鮮菌苔涂在試劑潤濕的紙片上；30秒內出現藍紫色為陽性，延遲反應或無顏色變化為陰性。
?蛋白胨、牛肉膏粉提供氮源、維生素、礦物質；乳糖、葡萄糖、蔗糖為可發酵糖類，其產酸時通過酚紅指示劑測出，酸性呈黃色，堿性呈紅色；硫代硫酸鈉可被某些細菌還原為硫化氫，與硫酸亞鐵中的鐵鹽生成黑色硫化鐵；較高含量的氯化鈉維持弧菌均衡的滲透壓；瓊脂是培養基的凝固劑。
副溶血性弧菌在3％氯化鈉三糖鐵瓊脂上的特征
嗜鹽性試驗
?挑取純培養的單個可疑菌落，分別接種0%、6%、8%和10%不同氯化鈉濃度的胰胨水，36℃±1℃培養24 h，觀察液體混濁情況。副溶血性弧菌在無氯化鈉和10%氯化鈉的胰胨水中不生長或微弱生長，在6%氯化鈉和8%氯化鈉的胰胨水中生長旺盛。
賴氨酸脫羧酶試驗培養基
?具有氨基酸脫羧酶的細菌，能分解氨基酸使其脫羧生成胺（賴氨酸→尸胺）和二氧化碳，使培養基變堿，使指示劑顯示出來。
?結果判讀：陽性為試驗管為綠色-藍綠色，對照管變黃色； 陰性為試驗管和對照管均變黃色，或均不變色。
3%氯化鈉甘露醇發酵試驗
?絕大多數細菌利用糖（醇）類作為碳源和能源，代謝產酸（如乳酸、醋酸、丙酸等），使酸堿指示劑變色來斷定。
?（指示劑為溴甲酚紫）結果判讀：陽性為變黃色； 陰性為紫色。
3%氯化鈉甘露醇發酵試驗
3%氯化鈉葡萄糖磷酸鹽胨水（VP試驗）
?某些細菌能分解葡萄糖產生丙酮酸，并進一步將丙酮酸脫羧成為乙酰甲基甲醇，后面在堿性環境下被空氣中的氧氧化成為二乙酰，進而與培養基中的精氨酸等所含的胍基結合，形成紅色的化合物，即VP試驗陽性。
我妻氏血瓊脂（神奈川試驗）
?酵母膏粉、蛋白胨提供氮源、維生素、生長因子；高含量氯化鈉可以抑制非弧菌的細菌生長，不影響副溶血性弧菌生長；磷酸氫二鉀為pH緩沖劑；甘露醇為可發酵的醇；結晶紫抑制革蘭氏陽性菌，特別抑制革蘭氏陽性桿菌和糞鏈球菌；兔血紅細胞用于檢測副溶血性弧菌是否具有特定溶血素；瓊脂為凝固劑。
?陽性結果為菌落周圍呈半透明環的β溶血。
副溶血性弧菌神奈川試驗陽性
ONPG試驗
?β-半乳糖苷酶試驗是以有些細菌可產生β半乳糖苷酶，能分解鄰硝基酚-β半乳糖苷(ONPG)，生成黃色的鄰硝基酚。
ONPG試驗
