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檢驗流程及注意事項
? 1、樣品制備
◆ 固體和半固體樣品：稱取25g樣品，加入225mL無菌稀釋液（滅菌蒸餾水或生理鹽水或磷酸緩沖液），充分振搖，或用拍擊式均質器拍打1 min 到2 min，制成1：10的樣品勻液。
◆ 液體樣品：以無菌吸管吸取25mL樣品至225mL無菌稀釋液（滅菌蒸餾水或生理鹽水或磷酸緩沖液）的適宜容器內（可在瓶內預置適當數量的無菌玻璃珠）或無菌均質袋中），充分振搖，或用拍擊式均質器拍打1 min 到2 min，制成1：10的樣品勻液。
◆ 取1mL 1:10稀釋液注入含有9mL無菌水的試管中, 另換一支1mL無菌吸管反復吹吸，或在螺旋混合器上混勻，此液為1:100稀釋液。
? 2、接種及培養
◆ 根據對樣品污染狀況的估計，選擇2個～3個適宜稀釋度的樣品勻液（液體樣品可包括原液），在進行10倍遞增稀釋的同時，每個稀釋度分別吸取1mL樣品勻液于2個無菌平皿內。同時分別取1mL樣品稀釋液加入2個無菌平皿作空白對照（用于監測培養基、稀釋液、平皿、吸管及操作環境保證實驗的有效性）。
◆ 及時將 20mL～25mL（用量增加，防止水分過度蒸發影響生長率）冷卻至46℃的馬鈴薯葡萄糖瓊脂或孟加拉紅瓊脂傾注平皿，并轉動平皿使其混合均勻。至水平臺面待培養基完全凝固。
◆ 傾注凝固后，正置平板，28℃±1℃，觀察并記錄培養至第5d的結果。
關于正置培養的討論
1、為水分蒸發導致蓋子內面產生水珠，影響觀察，同時平板邊緣開裂
2、孢子飄散導致計數不準
3、孢子污染培養箱
實際上在28℃下，平板的水分并不會蒸發的十分強烈，而且平板內部冷凝水產生一般是由于較大的溫度波動，此時需要考慮的是培養箱放置房間的溫度控制及培養箱的密封性。平板的開裂有兩個因素，一個是失水過多，第二個是因為平板材料與培養基比熱相差較大（玻璃平皿較容易出現），熱脹冷縮導致的瓊脂塊與平板分離。關于玻璃平皿還有其他的一些問題：因生產廠家的不同及不同廠家的品種參次不齊，玻璃平皿蓋底不和，縫隙較大，風機的空氣壓力易導致皿內真菌孢子的脫落，及培養箱污染。因此建議用一次性平皿，同時對培養間的溫度控制，挑選購買培養箱的時候注意其密封性。
? 3、培養基的使用（兩種任選一種）
 |  |
| PDA平板 | 孟加拉紅平板 |
◆ 兩種培養基都含有氯霉素，可以抑制細菌的生長；
◆ 對氯霉素耐藥的一些細菌在這兩種培養基上也生長，可以通過菌落形態來區分，或者通過染色鏡檢來判定；
◆ 如果需要分開報告霉菌和酵母菌的數量，主要通過菌落形態來區分。
細菌、酵母菌及霉菌的不同菌落形態
◆ 細菌：由于細胞小，形成的菌落較小，較薄、較透明、且有“細膩感”。可產生不同色素，菌落可呈現五顏六色且形態多樣。
◆ 酵母菌：由于細胞較大且不能運動，一般菌落比細菌大、厚且透明度差。產生色素較單一，通常乳白色，少數為橙紅色，個別黑色。
◆ 霉菌：菌落形態較大，質地疏松，外觀干燥，不透明，呈現蛛網狀、絨毛狀、棉絮狀或氈狀；菌落與培養基間的聯系緊密，不易挑起，菌落正面與反面、邊緣與中心的顏色和構造常不一致。
細菌、酵母菌及霉菌在電鏡及顯微鏡下的形態
霉菌：細胞構造與酵母菌相似，但外觀以菌絲體形式存在。
酵母菌：細胞通常有球狀、卵圓狀、橢圓狀、柱狀和香腸狀。
? 4、計數
◆ 計算統一稀釋度的兩個平板菌落數的平均值，再將平均值乘以相應的稀釋倍數。
◆ 若有兩個稀釋度平板上菌落數均在10-150CFU，則按照 GB4789.2 的相應規定進行計數。
◆ 若所有平板上菌落數均大于150CFU，則對稀釋度最高的平板進行計數，其他平板可記錄為多不可計，結果按平均菌落數乘以最高稀釋倍數計算。
◆ 若所有平板上菌落數均小于10CFU，則應按稀釋度最低的平均菌落數乘以稀釋倍數計算。
◆ 若所有稀釋度（包括液體樣品原液）平板均無菌落生長，則以小于1乘以最低稀釋倍數計算。
◆ 若所有稀釋度平板的菌落數均不在10-150CFU之間，其中一部分小于10CFU或大于150CFU,則以最接近10或150CFU的平均菌落數乘以稀釋倍數做計算。
? 5、結果報告
◆ 菌落數按“四舍五入”原則修約。菌落數在10以內時，采用一位有效數字報告；菌落數在10-100之間時，采用兩位有效數字報告。
◆ 菌落數大于或等于100時，前3位數字采用“四舍五入”原則修約后，取前2位數字，后面用0代替位數來表示結果；也可用10的指數形式來表示，此時也按“四舍五入”原則修約，采用兩位有效數字。
◆ 若空白對照平板上有菌落出現，則此次檢測結果無效。
◆ 稱重取樣以CFU/g為單位報告，體積取樣以CFU/mL為單位報告，報告或分別報告霉菌和/或酵母數。
過程中所用到的培養基項
| 貨號 | 名稱 | 規格 |
| 21050 | 馬鈴薯葡萄糖瓊脂 (PDA) | 250g/瓶 |
| CP0010 | 馬鈴薯葡萄糖瓊脂 (PDA)平板 | 90mm×20個 |
| 21010 | 孟加拉紅培養基(虎紅瓊脂) | 250g/瓶 |
| 021010B | 孟加拉紅 (虎紅)瓊脂平板 | 90mm×20個 |
| 021010P1 | 孟加拉紅培養基（虎紅瓊脂） | 250g/瓶 |
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