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噬菌體擴增結合環介導等溫擴增 (PA-LAMP) 用于快速檢測生禽肉中的活腸炎沙門氏菌

發布時間:2025-05-07      瀏覽次數:126    分享:

沙門氏菌屬是全球主要的食源性病原體之一。該屬由2600多種不同的血清型組成,即鼠傷寒沙門氏菌和腸炎沙門氏菌,它們主要導致人類沙門氏菌病病例。

Food Microbiology

沙門氏菌可以存在于多種食物中,但雞蛋和肉類等家禽產品是食物鏈中的主要來源。

雞肉的生產具有戰略意義,因為它是最經濟的肉類之一,也是全球消費量最大的肉類之一。歐盟在2022年生產了 980 萬噸雞肉,并從巴西、泰國和烏克蘭進口了高價值家禽產品,包括胸肉和家禽制品。歐盟在第1086/2011號法規 (EC)確定了25克新鮮禽肉中不含鼠傷寒沙門氏菌和腸炎沙門氏菌的標準。

因此,及時檢測沙門氏菌十分重要。

現有的基于 DNA 的技術檢測方法的一個典型局限性是它們無法區分活的微生物和非活的微生物。然而噬菌體可以專門感染和復制活細菌細胞,噬菌體僅在存在目標細菌時繁殖,而不是檢測細菌本身,因此基于噬菌體的檢測可以僅僅檢測活菌。

此外,單個噬菌體感染每個細菌細胞會產生數十到數百個新的病毒顆粒,從而提高了相同范圍內該方法的檢測限。

在本研究中,作者利用沙門氏菌噬菌體vB_SenS_PVP-SE2 (PVP-SE2) 結合LAMP擴增開發了一種新的腸炎沙門氏菌檢測方法,噬菌體PVP-SE2的潛伏期為 15分鐘,上升期為15分鐘,每個感染細胞平均有240個后代噬菌體,能夠縮短檢測沙門氏菌所需的富集期。因此,該方法允許在同一天 (8 h) 檢測活細胞。并將該方法在加標雞胸肉樣品中進行了評估。

熒光可視化圖片

圖 1 熒光可視化圖片 

結論:該研究成功開發了用于檢測雞胸肉中活腸炎沙門氏菌的PA-LAMP 測定法。在大約8小時內,包括樣品預富集、DNA 提取和LAMP,可以檢測到 1.1 CFU/25 g 的食品樣品。這使得該方法適用于當天檢測。此外,熒光可視化方法的開發允許該方法應用于現場檢測。總而言之,本研究開發了一種新的、快速的、簡單的、非技術要求高且經濟的方法,可以在同一個工作日內檢測出活腸炎沙門氏菌,其結果與參考方法(ISO 6579)相當。

參考來源:Lamas A, Santos SB, Prado M, Garrido-Maestu A. Phage amplification coupled with loop-mediated isothermal amplification (PA-LAMP) for same-day detection of viable Salmonella Enteritidis in raw poultry meat. Food Microbiol. 2023 Oct;115:104341. doi: 10.1016/j.fm.2023.104341. Epub 2023 Jul 11. PMID: 37567642.

來源:微生物安全與健康網,作者~翟慧潺。

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