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李斯特氏菌屬(Listeria)為一種短小的革蘭氏陽性無芽孢桿菌，DNA堿基組成G+C含量為36-38mol%，廣泛存在于環境當中，僅部分種對人及動物致病，導致腦膜炎、菌血癥和孕婦早產等。在李斯特氏菌屬中，單增李斯特氏菌(L. Monocytogenes)是一種重要的病原菌，宿主主要是人和動物。人感染李斯特氏菌99%是食用了單增李斯特菌污染的食品，尤其是即食類的食品。在美國每年大約有2500人患李斯特氏菌病，病死率高達20%-30%。因此，李斯特氏菌的分離和鑒定仍然是當今研究的熱點。
從食品或者臨床樣本分離的李斯特氏菌的鑒定方法主要有API(Analytic Products INC)鑒定系統、羅氏公司的Micro-ID、Biolog和HK-MID-Listeria鑒定系統等。
廣東環凱微生物科技有限公司利用101株野生分離株對新型HK-MID-Lister鑒定系統、傳統方法、API-Listeria方法進行了評估，鑒定結果見表1。
表1 三種方法鑒定結果的符合率
Table1 The coincidence rate of the three methods
|
Listeria sp. |
HK-MID(株) |
API (株) |
傳統方法 (株) |
符合率(%) |
| |
|
HK-MID和傳統方法 |
API和傳統方法 |
HK-MID和API | ||||
|
單增生李斯特氏菌 L. monocytogenes |
69 |
67 |
69 |
100 |
97.1 |
97.1 |
|
英諾克李斯特氏菌 L. innocua |
25 |
24 |
25 |
100 |
96.0 |
96.0 |
|
西爾李斯特氏菌 L. seeligeri |
2 |
0 |
2 |
100 |
0.0 |
0.0 |
|
威爾斯李斯特氏菌 L. welshimeri |
3 |
2 |
3 |
100 |
66.7 |
66.7 |
|
格式李斯特氏菌 L. grayi |
2 |
1 |
2 |
100 |
50.0 |
50.0 |
|
合計 |
101 |
94 |
101 |
100 |
93.1 |
93.1 |
從表1中可以得出，與傳統方法對李斯特氏菌屬的鑒定結果相比較， HK-MID-Listeria和API-Listeria分別達到了100%和93.1%。API-Listeria鑒定比傳統方法的鑒定率稍微偏低，具體是API- Listeria對2株單增李斯特氏菌、1株英諾克李斯特氏菌、2株西爾李斯特氏菌、1株威爾李斯特氏菌和1株格式李斯特氏菌不能給出鑒定結果；而傳統方法和HK-MID-Listeria對李斯特氏菌的鑒定完全相符。HK-MID-Listeria和API-Listeria鑒定方法之間差異主要是與兩種鑒定方法的原理不同引起的。
1、在溶血反應方面
HK-MID- Listeria鑒定系統在鑒定條上，第12孔為空白孔，添加血紅素到加有100微升菌懸液的第12 個空的孔中培養，通過是否產生沉淀分層即可判斷陰陽性，管底有沉淀結果為陰性即不溶血，反之為陽性即溶血（見圖1），因此HK-MID- Listeria的鑒定實驗不需要做溶血的補充實驗。
API-Listeria “DIM”的反應結果通過顏色變化來判讀，陽性反應為橙色, 陰性反應為淡粉色或淺橙色, 由于各種因素的影響，如：添加試劑不穩定等因素，常常會造成反應結為中間色，結果判讀比較困難，容易導致誤判。API-Listeria鑒定系統的“DIM”的反應并不能完全替代溶血反應，需要補充溶血性試驗。
2、HK-MID- Listeria使用操作更方便，結果更快、更可靠
API- Listeria 加樣過程中要特別注意不能產生氣泡；而HK-MID- Listeria對菌懸液的濃度沒有嚴格的要求，加樣更直接（見圖1）。HK-MID- Listeria鑒定條上面覆蓋有封口薄膜，可以防止在培養過程中液體過度蒸發；API- Listeria需要額外維持濕度的濕室。
API- Listeria鑒定的可疑菌落要求在非選擇性平板上生長的純培養物；而HK-MID- Listeria可以從選擇性平板或者顯色培養基平板上挑取單菌落進行鑒定，可以提前24h得到鑒定結果。
HK-MID- Listeria鑒定條已通過了國際AOAC 的認證。其鑒定系統中含有的12種生化反應中，有3種特征性反應：七葉苷、阿拉伯糖和海藻糖，這3種生化反應中任意一種為陰性即可判定鑒定的菌株為非李斯特菌屬，這3種生化反應可以提高HK-MID- Listeria 鑒定結果的準確性。
3、在數據庫方面
API- Listeria鑒定系統對幾個菌株不能鑒定其模式菌與其數據庫有很大的關系。API- Listeria鑒定系統的數據庫主要是根據常見李斯特氏菌和臨床分離樣本建立的數據庫，致使從食品中分離的部分菌株的生化反應模式不包含在API-Listeria的數據庫中。
HK-MID- Listeria鑒定系統模式菌數據庫是基于從食品、藥品和臨床診斷等分離的菌株的鑒定來建立的。因此，HK-MID- Listeria鑒定系統更適合應用從食品、藥品中分離的李斯特氏菌的鑒定。相對于API- Listeria鑒定系統來說，HK-MID- Listeria鑒定系統的數據庫中缺乏環境如土壤等中李斯特氏菌的數據。
總之，HK-MID- Listeria鑒定系統加樣方便，每孔滴加100微升左右；可以直接從選擇性培養基挑取菌落；不需要補充血平板實驗；通過AOAC認證，結果更可靠；整個鑒定過程節約48h。
參考文獻：田亮，盧勉飛，林干等，《新型HK-MID-Listeria 生化鑒定系統的鑒定效果評估》，食品研究與開發，2014,35（329）：86-88。
