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實驗室環境和人體表面微生物的檢測

發布時間:2014-06-23      瀏覽次數:6191    分享:

  平板培養基含有細菌生長所需要的營養成分,當取自不同來源的樣品接種于培養基上,在37℃溫度下培養,1~2天內每一菌體即能通過很多次細胞分裂而進行繁殖,形成一個可見的細胞群體的集落,稱為菌落。

  每一種細菌所形成的菌落都有它自己的特點,例如菌落的大小,表面干燥或濕潤、隆起或扁平、粗糙或光滑,邊緣整齊或不整齊,菌落透明或半透明或不透明,顏色以及質地疏松或緊密等。因此,可通過平板培養來檢查環境中細菌的數量和類型。

微生物檢測材料

微生物

試劑、試劑盒

  肉膏蛋白胨瓊脂

儀器、耗材

  滅菌棉簽  接種環  試管架  酒精燈

實驗步驟

1.寫標簽

  任何一個實驗,在動手操作前均需首先將器皿用記號筆做上記號,培養皿的記號一般寫在皿底上。如果寫在皿蓋上,同時觀察兩個以上培養皿的結果,打開皿蓋時,容易混淆。用記號筆寫上班級、姓名、日期,本次實驗還要寫上樣品來源(如實驗室空氣或無菌室空氣或頭發等),字盡量小些,寫在皿底的一邊,不要寫在當中,以免影響觀察結果。

2.實驗室細菌檢查

  (1)空氣將一個肉膏蛋白胨瓊脂平板放在當時做實驗的實驗室,移去皿蓋,使瓊脂培養基表面暴露在空氣中;將另一肉膏蛋白胨瓊脂平板放在無菌室或無人走動的其他實驗室,移去皿蓋。一小時后蓋上兩個皿蓋。

  (2)實驗臺和門的旋鈕

  ①用記號筆在皿底外面中央畫一直線,再在此線中間處畫一垂直線。

  ②取棉簽左手拿含有棉簽的試管,在火焰旁用右手的手掌邊緣和小指、無名指夾持棉塞(或試管帽),將其取出,將管口很快地通過煤氣燈(或酒精燈)的火焰,燒灼管口;輕輕地傾斜試管,用右手的拇指和食指將棉簽小心地取出。放回棉塞(或試管帽),并將空試管放在試管架上。

  ③弄濕棉簽左手取滅菌水試管,如上法拔出棉塞(或試管帽)并燒灼管口,將棉簽插入水中,再提出水面,在管壁上擠壓一下以除去過多的水分,小心將棉簽取出,燒灼管口,放回棉塞(或試管帽),并將滅菌水試管放在試管架上。

  ④取樣將濕棉簽在實驗臺面或門旋鈕上擦拭約2平方厘米的范圍。

  ⑤接種,A在火焰旁用左手拇指和食指或中指使平皿開啟成一縫。再將棉簽伸入,在瓊脂表面頂端接種(滾動一下),立即閉合皿蓋。將原放棉簽的空試管拔出棉塞(或試管帽),燒灼管口,插入用過的棉簽,將試管放回試管架。

  ⑥劃線另取接種環在火焰上滅菌,先將環端燒熱,然后將接種環提起垂直放在火焰上,以使火焰接觸金屬絲的范圍廣一些,待接種環燒紅,再將接種環斜放,沿環向上,燒至可能碰到培養皿的部分,再移向環端,如此很快地來回通過火焰數次。

  左手拿起平板,同樣開啟一縫,將滅過菌并冷卻了的接種環(可在瓊脂表面邊緣空白處試溫度,若發出濺潑聲,表示太燙),通過瓊脂頂端的接種區,向下劃線,直到平板的一半處。注意:接種環與瓊脂表面的角度要小,移動的壓力不能太大,否則會刺破瓊脂。

  閉合皿蓋,左手將平板向左轉動至空白處,右手拿的接種環再在火焰上燒灼,使冷。接種環通過前面劃的線條再在瓊脂的另一半,從上向下來回劃線至1/2處。

  燒灼接種環,轉動平板,劃最后1/4,立刻蓋上皿蓋,燒灼接種環,放回原處。整個劃線操作均要求無菌操作,即靠近火焰,而且動作要快。

3.人體細菌的檢查

  (1)手指(洗手前與洗手后)

  ①分別在兩個瓊脂平板上標明洗手前與洗手后(當然,班級、姓名、日期各項在每次寫標簽時是必不可少的)。

  ②移去皿蓋,將未洗過的手指在瓊脂平板的表面,輕輕地來回劃線,蓋上皿蓋。

  ③用肥皂和刷子,用力刷手,在流水中沖洗干凈,干燥后,在另一瓊脂平板表面來回移動,蓋上皿蓋。

  (2)頭發:在揭開皿蓋的瓊脂平板的上方,用手將頭發用力搖動數次,使細菌降落到瓊脂平板表面,然后蓋上皿蓋。

  (3)咳嗽:將去蓋瓊脂平板放在離口約6~8 cm 處,對著瓊脂表面用力咳嗽,然后蓋上皿蓋。

  (4)鼻腔

  ①按照實驗臺檢查法的步驟②和③,取出棉簽,并將其弄濕。

  ②用濕棉簽在鼻腔內滾動數次。

  ③按實驗臺檢查法的步驟④和⑤,接種與劃線,然后蓋上皿蓋。

4.將所有的瓊脂平板翻轉,使皿底在上,放37℃養箱,培養1~2天。

5.結果分析

  (1)菌落計數在劃線的平板上,如果菌落很多而重疊,則數平板最后1/4面積內的菌落數。不是劃線的平板,也一分為四,數1/4面積的菌落數。

  (2)根據菌落大小、形狀、高度、干濕等特征觀察不同的菌落類型。但要注意,如果細菌數量太多,會使很多菌落生長在一起,或者限制了菌落生長而變得很小,因而外觀不典型,故觀察菌落的特點時,要選擇分離得很開的單個菌落。

菌落特征描寫方法

  ①大小大、中、小、針尖狀。可先將整個平板上的菌落粗略觀察一下,再決定大、中、小的標準,或由教師指出一個大小范圍。

  ②顏色黃色、金黃色、灰色、乳白色、紅色、粉紅色等。

  ③干濕情況干燥、濕潤、粘稠。

  ④形態圓形、不規則等。

  ⑤高度扁平、隆起、凹下。

  ⑥透明程度透明、半透明、不透明。

  ⑦邊緣整齊、不整齊。

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